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質量: All-Direct方法＞Invitrogen-Gateway方法＞Clonetech SMART方法
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HiScript?III Reverse Transcriptase 高溫反轉錄酶
更高效的第三代反轉錄酶，更高的反應溫度有助于打開RNA的二級結構，更高的反應效率，質量同Superscript III反轉錄酶
- 產品詳情
HiScript?III Reverse Transcriptase 附件：實驗操作步驟 第一鏈cDNA合成 1. RNA變性（此步為可選步驟，RNA變性有助于打開二級結構，可在很大程度上提高第一鏈cDNA的產量。） 組分 使用量 Rnase free ddH2O to 12μL Oligo(dT)18 (50 μM) 1 μL Or Random Primers (50 μM) or 1μL Or Gene Specific Primers (2 μM) or 1μL Total RNA Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng dNTP mix 1μL 65℃加熱5 min，迅速置于室溫2 min。簡短離心收集反應液后，加入下表中的逆轉錄反應液，并輕輕吹打混勻。 2. 逆轉錄反應體系配制（20μL體系） 組分 使用量 上一步的反應液 12μL 5× HiScript Buffer 4μL DTT 2μL HiScript?III Reverse Transcriptase(200 U/μL) 1 μL RNase inhibitor (40 U/μL) 1 μL 3. 逆轉錄程序設置 溫度 時間 25℃(可選) 5 min 50℃-55℃ 15-50 min 85℃(可選) 5 min 2）逆轉錄溫度：推薦使用50-55℃。對于高GC含量模板或者復雜二級結構的模板，可將逆轉錄溫度提高至60-65℃。 3）85℃加熱5 min，目的是使逆轉錄酶失活，對于后續需要進行其他實驗的，比如二鏈合成等，此步驟需要省略。 ※ 逆轉錄產物可立即用于后續PCR或qPCR反應，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復凍融。
更高效的第三代反轉錄酶（逆轉錄酶），更高的反應溫度有助于打開RNA的二級結構，更高的反應效率，質量同Superscript III反轉錄酶。
貨號 規格 價格 HKR2305-01 10000U(200U/ul) 2000.00元 
廣泛的模板兼容性：可兼容動物、植物、細胞、病毒等多種模板
超強的雜質耐受度：對于常見雜質（乙醇、異丙醇、水平衡酚、腐殖酸）均具有超強的耐受度
卓越的逆轉錄效率：逆轉率效率等同于國際著名公司的Superscript III反轉錄酶，承諾質量完全一致，可以直接替代。
以1μg HeLa細胞RNA為模板，按照說明書推薦體系進行反轉錄，以1μl cDNA為模板，用PCR進行長片段擴增，將得到的產物進行瓊脂糖凝膠電泳，結果如圖所示：擴增條帶單一且產量高
長片段擴增電泳圖
HiScript? III Reverse Transcriptase對于復雜二級結構的RNA，推薦的反應溫度為50~55℃，對于存在復雜二級結構的模板，可將逆轉錄溫度提高至60~65℃，避免RNA復雜二級結構對cDNA合成的抑制，可有效合成高質量的cDNA。本產品可以合成長達12Kbp的cDNA，除此之外，本產品仍具有優越的持續合成能力和超強的雜質耐受度。
組分 HKR2305-01 (10000 U) 5 × HiScript?III Buffer 500 μl HiScript?III Reverse Transcriptase (200 U/μl) 50 μl 
- 30℃~- 15℃保存
【注】：1）當使用Random Primers時，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo(dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。
試劑
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