專業鑄就品質
專業的生物技術服務和產品供應商
擁有“海科生物(HiTech)”與“寶吉生物(BioGene)”兩個品牌
三種文庫構建方法比較與推薦
質量: All-Direct方法＞Invitrogen-Gateway方法＞Clonetech SMART方法
便捷: All-Direct方法＞Clonetech SMART方法＞Invitrogen-Gateway方法
Language
全基因組獲得性功能篩選-慢病毒文庫(轉錄激活文庫)
SAM文庫可強特異性激活基因組中編碼基因的轉錄，用于在人類細胞中進行功能獲得性篩選。 CRISPR/Cas9協同轉錄激活調節子（SAM）是一種設計的蛋白復合物，能夠強效激活內源性基因的轉錄。失活的Cas9核酸酶通過gRNA靶向于基因組中的特異性位點。SAM復合物包含3個轉錄激活結構域-VP64,P65和HSF1，可靶向于轉錄起始位點上游200bp位點，從而起到協同加強下游基因轉錄的作用。SAM使用失活的Cas9以確保不造成內源基因組的鏈斷裂。人全基因組SAM文庫可激活RefSeq數據庫 (23,430亞型)中的所有已知的編碼亞型，以用于功能獲得性的篩選。SAM文庫已經被廣泛使用于原代的小鼠，人細胞，干細胞，癌細胞及各種穩定細胞系。
- 產品詳情
SAM文庫可強特異性激活基因組中編碼基因的轉錄，用于在人類細胞中進行功能獲得性篩選。 CRISPR/Cas9協同轉錄激活調節子（SAM）是一種設計的蛋白復合物，能夠強效激活內源性基因的轉錄。失活的Cas9核酸酶通過gRNA靶向于基因組中的特異性位點。SAM復合物包含3個轉錄激活結構域-VP64,P65和HSF1，可靶向于轉錄起始位點上游200bp位點，從而起到協同加強下游基因轉錄的作用。SAM使用失活的Cas9以確保不造成內源基因組的鏈斷裂。人全基因組SAM文庫可激活RefSeq數據庫 (23,430亞型)中的所有已知的編碼亞型，以用于功能獲得性的篩選。SAM文庫已經被廣泛使用于原代的小鼠，人細胞，干細胞，癌細胞及各種穩定細胞系。SAM文庫篩選允許客戶在不同條件下鑒定任何細胞存活必須的基因，以及那些因為激活使癌細胞產生耐藥性的基因。如需了解關于SAM文庫設計&構建的完整信息，可查看文獻：Konermann S*, Brigham MD*, Trevino AE, Joung J, Abudayyeh OO, Barcena C, Hsu PD, Habib N, Gootenberg JS, Nishimasu H, Nureki O & Zhang F. Genome-scale transcriptional activation by an engineered CRISPR-Cas9 complex. Nature, doi:10.1038/nature14136. 70,290 gRNA序列；靶向人類基因組中23,430個不同的編碼亞型，每3條sgRNA序列即靶向1個編碼亞型 SAM 文庫克隆至pLenti sgRNA(MS2)_zeo載體 另隨文庫附上lenti dCas9-VP64_Blast及lenti MS2-P65-HSF1_Hygro兩個慢病毒。 + 文庫以1*10^8TU為單位交付，需求量可以1*10^8TU為單位向上增加。 SAM文庫是CRISPR gRNA 混合文庫，直接靶向基因組每一個轉錄起始位點的上游。 對于SAM 功能獲得性的篩選，人全基因組的SAM sgRNA文庫需與另外兩個SAM元件結合，即dCas9-VP64 與MS2-P65-HSF1，這三個SAM元件共同轉導入細胞中。為適于共轉導及篩選，三個慢病毒載體都有各自的抗性標記。三個元件都是以慢病毒載體形式交付，且病毒載體都是經過優化的，能夠復制高滴度，以有效轉導原代細胞或培養細胞系。SAM 文庫以較低的MOI值轉導到細胞群中，以保證每個細胞進入不超過1條gRNA。轉導完成后在進行文庫篩選之前，應對細胞進行NGS深度測序，以評估gRNA在細胞中的表現。篩選完成后，進行第二輪NGS測序并數據分析，用于鑒定篩選過程中丟失或富集的gRNA。為了篩選到SAM文庫中的陽性克隆，您需對多個富集gRNA的基因進行鑒定。更多SAM篩選流程，請參考SAM/Genome Engineering網站。 核酸酶活性失活的Cas9-VP64融合蛋白 sgRNA，其形成的莖環部分包含了兩個MS2 RNA適配子 MS2-P65-HSF1激活輔助蛋白 三個不同的激活結構域- VP64, P65 and HSF1， 協同激活轉錄 三個元件都由單獨的慢病毒載體編碼。 所有三個載體必須共轉染進細胞才能使得SAM發揮作用 人全基因組的SAM gRNA文庫序列可點擊這個.csv文件中獲取 我們交付的SAM文庫是一個混合文庫，包含：sgRNA克隆到gRNA慢病毒表達載體，以及需要共同轉導的dCas9-VP64 和 MS2-p65-HSF1慢病毒表達載體。 lenti sgRNA(MS2)_zeo Zeo lenti dCas9-VP64_Blast Blast lenti MS2-P65-HSF1_Hygro Hygro強效轉錄激活SAM文庫 —全基因組獲得性功能的篩選
人類SAM文庫內容
SAM文庫交付
文庫名稱 載體 貨號 交付量+ 周期* Human SAM Library pLenti sgRNA(MS2)_zeo
pLenti dCas-VP64_Blast
pLenti MS2-P-HSF1_HygroHKR5201-01 >10*8TU 5-7工作日 Customized Human SAM Library pLenti sgRNA(MS2)_zeo
pLenti dCas-VP64_Blast
pLenti MS2-P-HSF1_HygroHKR5202-01 >10*8TU 8-10 weeks Mouse SAM Library pLenti sgRNA(MS2)_zeo
pLenti dCas-VP64_Blast
pLenti MS2-P-HSF1_HygroHKR5203-01 >10*8TU 5-7工作日 Customized Mouse SAM Library pLenti sgRNA(MS2)_zeo
pLenti dCas-VP64_Blast
pLenti MS2-P-HSF1_HygroHKR5204-01 >10*8TU 8-10 weeks 如何使用SAM文庫，用于功能獲得性的篩選
SAM 文庫構成
SAM復合物由三部分構成：SAM文庫載體
載體名稱 選擇標記 載體圖譜 
CAS9基因編輯
產品>
本網站由阿里云提供云計算及安全服務